電泳操作:將 Ni-NTA 親和純化后的 rhIFN-α 樣本(20 μg)與 5×SDS 上樣緩沖液混合,95℃變性 5 分鐘后,上樣至 12% SDS-PAGE 凝膠,恒壓 120 V 電泳 90 分鐘。
染色檢測:電泳結束后,將凝膠放入蛋白快速染色液 1900500 中,室溫振蕩染色 20 分鐘,無需脫色,直接使用凝膠成像系統(Bio-Rad ChemiDoc)掃描成像。
結果分析:成像結果顯示,rhIFN-α 在 20 kDa 處呈現單一清晰條帶,無雜蛋白條帶(純度>98%),與 HPLC 檢測結果(純度 98.5%)一致性達 99%。對比傳統考馬斯亮藍染色,該染色液不僅將實驗時間從 4 小時縮短至 20 分鐘,還避免了脫色過程中 rhIFN-α 的微量損失(傳統染色后蛋白回收率為 92%,該染色液回收率達 98%)。
雙向電泳操作:提取肝癌細胞與正常肝細胞的總蛋白(各 100 μg),通過等電聚焦(IEF,pH 3-10)進行第一向分離,再經 12% SDS-PAGE 進行第二向分離,獲得 2-DE 凝膠。
快速染色與成像:將 2-DE 凝膠放入蛋白快速染色液 1900500 中,室溫振蕩染色 25 分鐘,直接使用激光掃描成像系統(GE Typhoon FLA 9500)獲取蛋白圖譜。
差異分析:通過 ImageMaster 2D Platinum 軟件分析,在肝癌細胞與正常肝細胞的蛋白圖譜中,共識別出 45 個差異表達蛋白(上調 28 個,下調 17 個),其中分子量 15 kDa 的熱休克蛋白 β1(HSPB1)在肝癌細胞中表達量是正常細胞的 3.2 倍。后續通過質譜鑒定與 Western Blot 驗證,確認 HSPB1 為肝癌潛在標志物。該案例中,蛋白快速染色液 1900500 的免脫色特性避免了 2-DE 凝膠中低豐度差異蛋白的損失,且快速染色效率確保了高通量樣本(30 塊凝膠 / 周)的及時分析。
某農業科研團隊致力于研究不同逆境脅迫下水稻葉片蛋白質組的變化。在干旱脅迫處理 7 天后,提取水稻葉片總蛋白,采用 15% SDS - PAGE 凝膠電泳對蛋白進行分離。電泳結束后,將凝膠浸入蛋白快速染色液 1900500 中,在搖床上緩慢振蕩染色 22 分鐘。染色完成后,清晰地觀察到在干旱脅迫組中,相對分子量約 28 kDa 的一種蛋白條帶強度明顯增強,而在對照組中該條帶較弱。經后續的蛋白質免疫印跡(Western Blot)驗證,該蛋白為水稻中的一種干旱誘導蛋白(DIP - 28)。傳統染色方法不僅耗時久,而且在脫色過程中容易導致植物蛋白尤其是一些小分子防御蛋白的丟失,影響實驗結果的準確性。蛋白快速染色液 1900500 的應用,使得植物蛋白研究中的染色檢測變得高效、便捷,能夠快速準確地反映不同處理條件下植物蛋白表達的差異,為深入探究植物響應逆境脅迫的分子機制提供了有力支持。
在科研單位領域,上海易匯生物充分考慮到科研項目的緊迫性與前瞻性需求,針對實驗耗材同步推出了現貨供應及期貨定制服務,一舉解決了科研單位長期面臨的 “緊急實驗缺耗材、長期需求難規劃" 的棘手痛點。易匯生物的產品運營團隊透露,當下熱門的細胞培養皿、PCR 八聯管等實驗耗材,均有充足現貨儲備,可實現當日下單、次日送達,確保科研進程無縫銜接;而對于定制化的試劑、特殊規格的耗材等期貨服務,易匯生物憑借專業的研發生產能力,能夠依據科研項目周期提前 30 至 60 天鎖定產能,從源頭保障實驗進度有條不紊地推進 。